低速离心机在提取细胞质和细胞核蛋白中的应用
时间：2018-06-06
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来源：四川蜀科仪器有限公司
蜀科低速离心机操作简单、运行平衡、性能稳定、安全可靠，入选“国产好仪器”，在临床医学，放射免疫、生物化学、食品卫生、环保等科研领域都有广泛应用。今天来介绍一下低速离心机在提取细胞质和细胞核蛋白中的应用。
提取细胞质和细胞核蛋白的操作步骤如下：
1、决定细胞生长状态，细胞生长状态应该是80%或者更好：2、用蜀科离心机以1500r/min离心5min
3、弃上清液，用等体积的冷PBS洗细胞，像步骤2那样，反复3次
4、根据估计的沉淀量加入5倍体积的isotonic lysis buffer到细胞颗粒中，使细胞温和悬浮，尽量避免泡沫
5、加入裂解液lysis buffer在悬浮的细胞中，并放在冰上15min让细胞膨胀，可以通过显微镜检查
6、对于细胞实验中膨胀的细胞，加入10%的IGEPAL CA-630使最后的浓度达到0、3%，混匀，加的时候要温和
7、立即用蜀科低速离心机离心（量大的可以用1、5ml的 EP管，以5500r/min离心30s；量大的可以用50ml的管子以5500r/min离心2min）
8、转移上清液（细胞质蛋白）到一个新的冷冻管中
9、用悬浮颗粒5倍体积的isotonic lysis buffer悬浮细胞，并混匀。
10、用离心机离心细胞悬浮液，以1500r/min离心5min，移掉上清液
11、用2/3倍体积的extraction buffer悬浮颗粒
12、把管子放置在震荡混匀器上，以700r/min，15min震荡混匀，接着以1400r/min,15min,整个过程要仔细，避免泡沫产生
13、以9400r/min离心15min，低温离心完后转移上清液到一个新的冷冻离心管中
14、分成几份用液氮冷冻，并且保存起来（长期保存应放在-80℃上，短期保存要放在-20℃上）。
蜀科仪器专注于离心机的研发、生产、销售，产品远销海内外，低速离心机各项指标更是处于行业优势地位，还可提供定制服务，欢迎来电咨询。
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