蜀科台式低速离心机制备大肠杆菌感受态细胞
时间：2017-08-01
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来源：四川蜀科仪器有限公司
蜀科台式低速离心机操作简单、运行平衡、性能稳定、安全可靠，广泛应用于临床医学，放射免疫、生物化学、食品卫生、环保等科研领域。今天来科普一下如何用蜀科台式低速离心机制备大肠杆菌感受态细胞，给各位实验室的朋友参考。
1.首先将受体大肠杆菌接种于LB培养基中活化，置于恒温培养箱中37℃培养过夜。。。
2.接着取一丁点（枪头沾一下）上述大肠杆菌培养物菌落接种于3-5毫升LB试管中，于恒温振荡器上，37℃振荡培养过夜（约12-16 小时）。
4.再是用移液管无菌条件下，取过夜培养液1 毫升，接种于新鲜的LB 中（100毫升LB/250毫升三角瓶，接种量按菌液浓度而定，一般在1%左右），于恒温振荡器上37℃培养2―3 小时。
5.无菌条件下将上述1 毫升菌液倒入1.5毫升EP 管中（离心管应带盖并高压灭菌过），每组2支。
6、带菌液的离心管置于冰上10 分钟，冷却菌液，平衡好，置于蜀科台式低速离心机上，3500r/min 离心5 分钟。
7、无菌条件下，倒去上清LB，倒斜离心管，让LB 流干，留下沉淀菌体，加入预冷的100mmol/L CaCl2溶液600微升，用微量取样器轻轻吸冲底部沉淀菌体，使其悬浮后，把2支管转为1支，摇匀后于冰浴中放置30分钟。
8、重新将CaCl2 菌悬浮液置于蜀科台式低速离心机上，3500r/min离心10分钟，小心侧倒掉上清CaCl2 ，留沉淀菌体。
9、再把菌体悬浮在200 微升100mmol/L CaCl2 的溶液中，置于冰上作为转化的受体菌液。此制备的感受态细胞应在此步后1小时至24小时内使用，效率比较高。
10.在事先制备好的含50μg/ml Amp的LB 平板表面加40ml X-gal 储液和4μl IPTG储液,用无菌玻棒将溶液涂匀,置于37℃下放置3-4小时,使培养基表面的液体完全被吸收，备用。
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