蜀科低速冷冻离心机对组织样品的前处理
时间：2017-08-02
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来源：四川蜀科仪器有限公司
蜀科低速冷冻离心机在实验室样品前处理中有重要的作用。今天我们来了解一下前处理的过程。
一、匀浆介质的制备
一般采用pH7.4，0.01mol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA-2Na，0.01mol/L蔗糖，0.8%氯化钠溶液或直接用0.86%的生理盐水作为匀浆介质。
一般采用pH7.4，0.01mol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA-2Na，0.01mol/L蔗糖，0.8%氯化钠溶液或直接用0.86%的生理盐水作为匀浆介质。
二、组织匀浆的制备
1、取组织块（0.1g～0.2g）最少可到2～5mg在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，准确称重，放入5ml的匀浆管中。
2、按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质（pH7.4，0.01mol/L Tris-HCl，1mmol/LEDTA-2Na，0.01mol/L蔗糖，0.8%的氯化钠溶液）或者0.86%的生理盐水于匀浆管中，冰水浴条件下，用眼科小剪尽快剪碎组织块。
3、匀浆的方式有多种：手工匀浆，机器匀浆，超声粉碎。
①手工匀浆：左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，制成10%的匀浆液。
②机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000转/分上下研磨制成10%组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
③超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用400安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
镜检观察:取少量组织匀浆作涂片（直接涂片、染色均可以），显微镜下观察细胞是否破碎，若没有则可延长匀浆时间。
4、将制备好的10%匀浆液用蜀科低速冷冻离心机2500转/分左右，离心10～15分钟，取上清液进行测定.
三、样本保存
动物组织样本暂时不测定，可立即低温冻存，温度越低越好，中间如不反复冻融，-20℃以下可保存三个月，-70℃以下可保存六个月。
动物组织样本暂时不测定，可立即低温冻存，温度越低越好，中间如不反复冻融，-20℃以下可保存三个月，-70℃以下可保存六个月。
制备好的匀浆液建议不要冻存，最好当天进行测定，如放置时间过长相关酶活会有所下降，部分指标4℃可存放3～5天(如SOD要存放2～3天，MDA可存放3～5，总蛋白测定可存5～7天等)。
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